DESENVOLVIMENTO E PADRONIZAÇÃO DE PCR MULTIPLEX PARA DETECÇÃO E GENOTIPAGEM DE PAPILOMAVÍRUS CANINO

DESENVOLVIMENTO E PADRONIZAÇÃO DE PCR MULTIPLEX PARA DETECÇÃO E GENOTIPAGEM DE PAPILOMAVÍRUS CANINO

• Autor
• Jordana Dantas Rodrigues Reis
• Co-autores
• José Alves Neto , Gerlane Salgueiro Barros , Marcus Vinicius de Aragão Batista.
• Resumo

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  Introdução: O papilomavírus canino (CPV) é responsável por diferentes tipos de lesõesem cães, como papilomas orais e cutâneos, placas pigmentadas e carcinoma de células escamosas (CCE). Para o diagnóstico molecular do vírus já foram utilizados primers degenerados, primers para PCR em tempo real, mas não existem primers que identifiquem todos os tipos de CPV e nem uma estratégia de PCR multiplex que facilite a genotipagem do vírus. Objetivo: Desenvolver e padronizar uma estratégia para detecção molecular e genotipagem de CPV utilizando PCR multiplex. Metodologia: As sequências do gene L1 dos 23 tipos de CPV foram obtidas no banco de dados PaVE. Estas foram utilizadas para o desenho dos primers no Prime3plus. Os primers escolhidos foram testados no Blastn. Foram montados 5 blocos de primers; cada um agrupando os tipos com diferença de amplicon de 50 pb. O bloco 1 agrupou os tipos CPV1 (182pb), CPV7 (238pb), CPV4 (292pb), CPV3 (356pb). Este bloco foi testado em 33 amostras de lesões causadas pelo vírus. Para a PCR, as condições utilizadas foram: 2 min a 95ºC; 40 ciclos de 30s por 95ºC, 50s por 55ºC e 10s por 72ºC; e 10 min a 72ºC. O volume final do produto para a reação foi de 25 µL, contendo Taq DNA Polimerase Master Mix Red, os primers, a água ultrapura e o DNA molde. Utilizou-se para a eletroforese, a Agarose 1,5%. Resultados: As 33 amostras apresentaram amplicon de aproximadamente 182pb, identificando o CPV1, que foi confirmado através do sequenciamento de DNA. A amostra de nº 33, que ainda não foi sequenciada, também teve este amplicon.  Conclusão: Este é o primeiro trabalho a desenvolver e padronizar uma reação de PCR multiplex para detecção e genotipagem de CPV. Foi possível fazer a genotipagem do CPV1 em diferentes tipos de lesões, que apresentaram papilomas orais e cutâneos, e CCE oral, demonstrando-se, assim, a importância da estratégia para o diagnóstico molecular do CPV para inferência do tipo viral associado às diferentes lesões que afetam os cães.

   

• Palavras-chave
• Papilomavírus canino; PCR multiplex; primers.
• Modalidade
• Pôster
• Área Temática
• Biologia molecular de parasitos e vetores

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